Participación de las proteínas NS3 y NS5 en el ensamblaje in vitro del virus dengue-2

Se logró la expresión soluble de proteínas recombinantes de dos regiones del dominio helicasa NS3 del DENV2, las cuales se usaron para inmunizar ratas y producir anticuerpos policlonales. Los dos anticuerpos anti-NS3 demostraron su eficacia en ensayos de Westernblot e inmunofluorescencia, y uno de ellos (anti- NS3403_599), en ensayos de inmunoprecipitación.
Investigadores
Liliana Morales
Myriam L. Velandia
María Angélica Calderón
Jaime E. Castellanos
Jacqueline Chaparro Olaya
Lineas de Investigación:
Salud y Tecnología
Grupo de investigación:
Grupo de Virología
Laboratorio de Parasitología Molecular
Imagen interna investigaciones

El dengue es una enfermedad causada por uno de los cuatro serotipos del virus del dengue (DENV) y es endémica en, aproximadamente, 130 países. Su incidencia ha aumentado notablemente en las últimas décadas, así como la frecuencia y la magnitud de los brotes. A pesar de los esfuerzos, no existen tratamientos profilácticos ni terapéuticos contra la enfermedad y, en ese contexto, el estudio de los procesos que gobiernan el ciclo de infección del DENV es esencial para desarrollar vacunas o terapias antivirales. Una de las moléculas del DENV más prometedoras es la proteína no estructural 3 (NS3), la cual es indispensable para la replicación viral y es uno de los principales blancos inmunológicos durante la infección.

El objetivo de la investigación fue producir anticuerpos policlonales para contribuir a los futuros estudios sobre las interacciones entre la proteína NS3 y otras proteínas celulares; se utilizó dos proteínas recombinantes del dominio helicasa de NS3 del DENV de serotipo 2, las cuales se emplearon para inmunizar ratas y producir anticuerpos policlonales.
Como resultado se nota que los anticuerpos producidos fueron útiles en ensayos de Western blot e inmunofluorescencia y se reportó por primera vez un anticuerpo policlonal anti-NS3 que permitió la inmunoprecipitación de la proteína viral y la detecta con Western blot sin necesidad de inducir sobreexpresión de NS3 o de usar extractos de células marcados metabólicamente con radioisótopos.
En conclusión las proteínas recombinantes expresadas y los anticuerpos producidos constituyen herramientas valiosas para estudiar procesos infecciosos del DENV que involucren a la proteína NS3 y evaluar pruebas dirigidas a interferir las funciones de esta proteína.

chaparrojacqueline@unbosque.edu.co